微管具有多種細(xì)胞功能，包括在有絲分裂期間分離染色體、維持細(xì)胞形態(tài)、調(diào)控纖毛和鞭毛的擺動以及參與細(xì)胞物質(zhì)的運輸。大量腫瘤化學(xué)療法靶向微管蛋白的組裝或拆卸過程，強(qiáng)調(diào)了微管與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。另外，研究表明，微管組裝或拆卸的失調(diào)與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)。

從結(jié)構(gòu)上講，微管是由 α-和 β-Tubulin 異二聚體組成中空管狀結(jié)構(gòu)，它們端對端連接形成原纖絲，原纖絲橫向組合構(gòu)成 25 nm 的微管。與 α-和 β-Tubulin 不同的是 γ-Tubulin，其包含在微管組織中心（MTOC）中。通過與其他蛋白質(zhì)的結(jié)合，γ-Tubulin 充當(dāng) α/β-Tubulin 二聚體起始聚合的支架。

微管結(jié)構(gòu)示意圖，圖片來源：biologydictionary.net

特異性示蹤微管蛋白，是解析疾病病理機(jī)制、揭秘微管蛋白功能的重要前提。

Tocris?獨家發(fā)布的新型微管探針紫杉醇 Janelia Fluor? 646（貨號 6266），可用于微管細(xì)胞骨架的直接成像。該探針僅在與微管結(jié)合時才發(fā)出熒光，因此實驗過程中無需洗脫。

• 紫杉醇是與 Tubulin 結(jié)合的二萜，可促進(jìn)并穩(wěn)定 Tubulin 蛋白聚合，這是其具有抗有絲分裂和細(xì)胞毒性作用的原因。熒光染料與紫杉醇的偶聯(lián)為微管細(xì)胞骨架的成像提供了便捷的方法?；诖嗽淼臒晒馓结樣?Flutax 1（貨號 2226）和 Flutax 2（貨號 6254）。

• 新型微管探針結(jié)合了紅色熒光染料 Janelia Fluor? 646，最大激發(fā)波長為 646 nm；最大發(fā)射波長為 664 nm。Janelia Fluor? 系列熒光染料相較于普通熒光染料，其熒光更明亮，光穩(wěn)定性更高。最突出的優(yōu)勢在于其具有細(xì)胞膜通透性，能夠進(jìn)行活細(xì)胞染色或固定細(xì)胞染色，以及細(xì)胞內(nèi)的單分子示蹤。

紫杉醇 JaneliaFluor? 646 探針在 COS7 細(xì)胞上的應(yīng)用：COS7 細(xì)胞用 3 μM 紫杉醇 JaneliaFluor? 646 標(biāo)記，在 37 °C 下放置 1 小時。在 Leica TCS SP8 共焦激光掃描顯微鏡上成像并拍攝。

附紫杉醇 JaneliaFluor? 646 實驗方案：

1. 在 DMSO 中準(zhǔn)備紫杉醇 JaneliaFluor? 646 的儲備溶液。儲備溶液可以等分并在 ≤ -20 °C 的環(huán)境下最多保存 1 個月；
2. 將儲備溶液稀釋到 37 °C 的溫?zé)崤囵B(yǎng)基中，然后放入預(yù)熱的盒子中（用于存放于培養(yǎng)箱）。工作溶液應(yīng)在同一天制備并使用；
3. 以 3 μM 的終濃度應(yīng)用于活細(xì)胞檢測，也可以使用較低的濃度，并且應(yīng)針對不同的實驗優(yōu)化濃度；
4. 在 37 °C 孵育 1 小時之后成像。理論上無需洗脫，若選擇洗脫方案，可在成像前用 1x PBS 和 2% 的 BSA 沖洗細(xì)胞 3 次，并加入新鮮培養(yǎng)基。

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