血清，「蜜糖」亦或是 「砒霜」？它既提供細(xì)胞生長的必備營養(yǎng)，也會因其復(fù)雜的成分和存在病原體污染的可能性而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

因而，在神經(jīng)細(xì)胞和干細(xì)胞培養(yǎng)中，無血清體外培養(yǎng)日益成為主流。此時，應(yīng)該如何選擇無血清培養(yǎng)基補充劑呢？

首先，一分鐘了解無血清培養(yǎng)基補充劑的變遷史：

1993 年 G. J. Brewer 等研究者開發(fā)了 B27‐supplemented neurobasal?成分明確的補充劑，該補充劑在已有的無血清培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，優(yōu)化了 20 種成分的濃度，從而延長大鼠胚胎海馬神經(jīng)元的存活時間，后續(xù)被廣泛使用。

由于商品化的培養(yǎng)基補充劑在培養(yǎng)神經(jīng)元的能力上表現(xiàn)出很大的差異，2008 年 Yucui Chen 等人用 21 種不同的成分（NS21）重新優(yōu)化和修改了 B27 的配方，以更好地支持神經(jīng)元的培養(yǎng)，維持神經(jīng)元的形態(tài)特征、突觸的形成和突觸后反應(yīng)。同時，研究中發(fā)現(xiàn) B27/NS21 的質(zhì)量受牛血清白蛋白質(zhì)量的影響，NS21 使用 holo-transferrin 比使用 apo-transferrin 效果更好。

R&D Systems? 的 N21-MAX 培養(yǎng)基補充劑（N21-MAX Media Supplement，貨號 AR008）在傳統(tǒng)的 B27 和 NS21 神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)基補充劑的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，不含血清且成分明確，保證神經(jīng)細(xì)胞的健康生長，促進(jìn)神經(jīng)突延伸和突觸成熟。

在 E18 大鼠海馬神經(jīng)元無血清培養(yǎng)基中添加 N21-MAX Media Supplement（貨號 AR008 ），顯示突觸標(biāo)記物 Synaptotagmin（抗體貨號 MAB4364 ）和 CAM Kinase II（抗體貨號 MAB5584 ）的穩(wěn)定表達(dá)。

如今，越來越多的 B27 相似補充劑面世，用于優(yōu)化干細(xì)胞和 3D 細(xì)胞培養(yǎng)，而 N21-MAX 在調(diào)控干細(xì)胞擴(kuò)增，促進(jìn)干細(xì)胞分化等方面也表現(xiàn)出色。每批 N21-MAX 都在原代海馬神經(jīng)元上進(jìn)行測試，以確保品質(zhì)的穩(wěn)定性。

R&D Systems? 提供多款無血清培養(yǎng)基補充劑，主要產(chǎn)品及應(yīng)用請參考：

除此之外，N-2 MAX Media Supplement 和 N21-MAX Media Supplement 也可作為多種類器官實驗的培養(yǎng)基補充劑。針對不同的類器官培養(yǎng)，在官網(wǎng)有配套的實驗流程及配方可供參考（https://www.rndsystems.com/cn/products/organoid-and-3d-culture-reagents），如人胃類器官培養(yǎng)等：

下面我們通過 5 個小問答，來進(jìn)一步解答有關(guān)培養(yǎng)基補充劑的疑問：

1. 為什么要使用成分明確的培養(yǎng)基培養(yǎng)神經(jīng)元 ?

無血清且成分明確的培養(yǎng)基通常被用作含血清的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的替代品，以減少研究人員不希望看到的實驗波動。不可控的實驗波動通常與培養(yǎng)基中添加的血清所含的成分有關(guān)，如維生素、激素和生長因子水平的不確定性。

當(dāng)使用成分明確的培養(yǎng)基時，這些變動因素隨之消除，病原體污染的可能性也會降低。此外，無血清培養(yǎng)基便于研究人員為特定實驗設(shè)計開發(fā)特定用途的培養(yǎng)基。

2. N21-MAX Media Supplement (貨號AR008) 與其它神經(jīng)干細(xì)胞補充劑相比，優(yōu)勢在哪里？

我們實驗室內(nèi)部進(jìn)行了對比測試，發(fā)現(xiàn)在長期培養(yǎng)（21 天）E18 大鼠海馬神經(jīng)元時，使用 AR008 可觀察到更好的突觸相關(guān)蛋白表達(dá)，增大突觸內(nèi) puncta 的密度，促進(jìn)突起生長（下圖）。這主要是因為 N21-MAX 培養(yǎng)基補充劑含有 holo-transferrin，而其他補充劑通常含有 apo-transferrin。文獻(xiàn)報道 holo-transferrin 是神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的首選。

3. N-2 Plus Media Supplement (貨號AR003) 和N-2 MAX Media Supplement (貨號 AR009)的區(qū)別是什么？

AR003 和 AR009 均可用于培養(yǎng)神經(jīng)元、神經(jīng)祖細(xì)胞和干細(xì)胞，它們的主要區(qū)別在于胰島素的來源。AR003 含有天然牛胰島素，而 AR009 含有重組人胰島素，其它成分完全相同。兩款產(chǎn)品經(jīng)過平行實驗驗證。

4. 除了人 Transferrin 外，N-2 MAX 培養(yǎng)基補充劑是否含有其它動物源成分 ?

不。除人轉(zhuǎn)鐵蛋白外，N-2 MAX 培養(yǎng)基補充劑不含任何動物源成分。GMP N-2 MAX 培養(yǎng)基補充劑（貨號 AR016）是一種無動物源成分的添加劑。

5. N-2 MAX Media Supplement 和 N-2 Plus Media Supplement 是否可以解凍，分裝，再冷凍，用于更小批次的基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ?

是的，這不會影響補充劑的穩(wěn)定性。有限的凍融，分裝成小包裝使用，是可以接受的。

以上文字和圖片來源于Bio-techne