免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）和免疫熒光（IF），姑且稱為定位檢測抗原表達(dá)的「三駕馬車」，是生物學(xué)研究中常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。

三種方法原理相似，易于混淆。實(shí)驗(yàn)人員在挑選抗體產(chǎn)品時常常有這樣的困惑，某一種應(yīng)用的抗體是否也適用于另外兩種實(shí)驗(yàn)？是，也不是。具體要視不同品牌而定，下面讓我們?yōu)槟灰唤饣螅?/p>

「三駕馬車」的應(yīng)用有何不同？

首先，我們一起了解下三種檢測方法的區(qū)別。IHC 應(yīng)用的樣本類型是組織，ICC 的樣本類型是細(xì)胞，而 IF 則是采用熒光標(biāo)記抗體實(shí)現(xiàn)組織/細(xì)胞中目的蛋白的定位。其中，IHC 更可以根據(jù)組織切片的形式分為 IHC-P（石蠟切片）及 IHC-Fr（冰凍切片）。

Bio-Techne 的抗體產(chǎn)品選擇的特別之處在于，不會顯示單獨(dú)的 IF 應(yīng)用，而是與 ICC 合并為一類：ICC/IF。因而，涉及三種檢測方法的應(yīng)用標(biāo)識主要分為：ICC/IF，IHC（IHC-P、IHC-Fr）。

左上，IHC：使用 HIF-1 alpha 抗體（Novus，NB100-105）在人腎臟中染色 HIF-1 alpha；右上，ICC：使用 10 μg/mL IRAK4 抗體（Novus，NBP1-77231）和 HRP 偶聯(lián)的二抗在 K562 細(xì)胞中檢測到 IRAK4 的表達(dá)。細(xì)胞用 DAB 染色（棕色），細(xì)胞核用蘇木精（藍(lán)色）復(fù)染。左下，基于組織的 IF：使用 1 μg/mL 的 GAP-43 抗體（Novus，NB300-143）及 AlexaFluor? 488 標(biāo)記的二抗，檢測 E15.5 小鼠胚胎的石蠟切片中 GAP-43 的表達(dá)。DAPI 用于細(xì)胞核復(fù)染；右下，基于細(xì)胞的 IF：使用 15 μg/mL 的 IRAK4 抗體（R&D Systems，AF3919）及 NorthernLights? 557 偶聯(lián)的二抗（紅色）在 THP 1 細(xì)胞中檢測 IRAK4。用 DAPI（藍(lán)色）對細(xì)胞核進(jìn)行染色。

如何挑選合適的 IHC/ICC/IF 抗體？

在了解三種檢測方法的差別之后，我們回到文章開頭的問題，一種抗體是否可以在三種檢測方法中通用？換句話說，如何挑選適用于自身實(shí)驗(yàn)的抗體呢？

Bio-Techne 旗下兩大抗體品牌 R&D Systems? 與 Novus Biologicals?，在抗體的適用范圍（IHC/ICC/IF）描述方面存在差異：

1. R&D Systems? 品牌的抗體在產(chǎn)品頁面顯示已經(jīng)驗(yàn)證的種屬（Species）及應(yīng)用 (Applications)，這些應(yīng)用通常在說明書中會有詳細(xì)的信息。

[特別注意] R&D Systems? 品牌抗體應(yīng)用中 IHC 或者 ICC/IF 只要有一項(xiàng)，則可以適用于 IHC 及 ICC/IF 的應(yīng)用。一般來說，應(yīng)用中包含「IHC」的抗體同時適用于 IHC-Fr 及 IHC-P，除非說明書中另有聲明。

例如，巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 CD68（貨號 MAB20401）抗體，應(yīng)用欄中僅標(biāo)出了 ICC/IF，雖然不能確定一種抗體在每一種組織中都有同樣的表現(xiàn)，但我們可以證明其對固定抗原的識別，所以也可應(yīng)用于 IHC 實(shí)驗(yàn)。

溫馨提示：若說明書中沒有 IHC 以及 ICC/IF 的應(yīng)用說明，表明我們沒有任何數(shù)據(jù)來支持相應(yīng)的應(yīng)用，即不能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 

2. 同樣的，Novus Biologicals? 抗體產(chǎn)品頁面也顯示出所有經(jīng)過驗(yàn)證的種屬（Species）及應(yīng)用 (Applications)。值得一提的是，除 Novus Biologicals? 實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的種屬及應(yīng)用外，部分?jǐn)?shù)據(jù)也來自于客戶的鼎力支持。

除此之外，還有些抗體包含 (-) 標(biāo)志，代表驗(yàn)證過為陰性的種屬或者應(yīng)用，不建議您再次進(jìn)行嘗試。

[特別注意] Novus Biologicals? 的 IHC 與 ICC/IF 兩種應(yīng)用不能通用，這一點(diǎn)與 R&D Systems? 的規(guī)定有所不同。此外，若有單獨(dú)標(biāo)注 IHC 的子類（IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount），只驗(yàn)證用于單獨(dú)標(biāo)注的子類，如果只有 IHC 標(biāo)志而無子類標(biāo)志，則適用于所有的 IHC 切片類型。即：

• 抗體 A 標(biāo)注了 IHC，則可以應(yīng)用于 IHC-P、IHC-Fr，未驗(yàn)證 ICC/IF；
• 抗體 B 標(biāo)注了 IHC，IHC-Fr，則可以應(yīng)用于 IHC-Fr，未驗(yàn)證 IHC-P 及 ICC/IF；
• 抗體 C 標(biāo)注了 ICC/IF，則可以應(yīng)用于 ICC/IF，未驗(yàn)證 IHC-P 及 IHC-Fr。

以自噬標(biāo)志物 LC3B（NBP2-46892）為例，應(yīng)用欄中標(biāo)出了 ICC/IF，IHC，IHC-P，說明此產(chǎn)品已驗(yàn)證適用于 ICC/IF 和 IHC-P，未驗(yàn)證 IHC-Fr 實(shí)驗(yàn)。

根據(jù)品牌的不同，可以選擇合適的官方驗(yàn)證過的抗體。謹(jǐn)記上述小貼士，開展實(shí)驗(yàn)不用愁。

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